尊龙凯时的TurboTEV蛋白酶是源自烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白催化片段的改良形式，这是一种半胱氨酸蛋白酶，能特异性识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly序列的切割位点，并在Gln与Gly之间进行裂解。此酶在4°C下保持良好的活性，具有高特异性和出色的稳定性，且无需特殊缓冲液，能够在适合目标蛋白的缓冲液中有效运作。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa，带有GST和His标签，便于通过Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）树脂轻松去除剪切标签。其来源于大肠杆菌，活性超过10Units/µg；在30℃下，1单位TurboTEV蛋白酶能够在1小时内裂解3µg对照底物的85%。

尊龙凯时提供的Protocol包括以下步骤：

1. 蛋白质裂解：
   • A. 配制新鲜的冰冷透析缓冲液（例如：25mM Tris-HCl, pH 8.0, 150-500mM NaCl, 14mM β-巯基乙醇）。
   • B. 用透析缓冲液将目标蛋白稀释至1-2 mg/mL（注意：若在透析缓冲液中发生聚集，这一步可以省略）。同时留出少量未切割样品进行分析。若目标蛋白来自镍柱洗脱，且与EDTA兼容，可将其浓度调整至0.5mM。
   • C. 以1:100（w/w）的比例将TurboTEV蛋白酶加入目标蛋白中，即100mg目标蛋白需配1000 Units（1mg）TurboTEV蛋白酶。
   • D. 在4℃下透析过夜（约16小时）。
2. 去除TurboTEV蛋白酶： 上柱。
3. SDS-PAGE分析： (可选)

尊龙凯时的TurboTEV蛋白酶广泛应用于以下领域：

• 蛋白裂解功能；
• 从重组蛋白中去除融合标签；
• 蛋白质及肽的纯化。

常见问题解答：

• 问： TEV消化反应中，缓冲液条件的重要性如何？是否存在任何因素可能会影响TurboTEV的切割效率？
• 答： (a) 1mM DTT是可以的；(b) 不建议使用10%的甘油；(c) 20mM组氨酸不推荐；(d) 500mM NaCl也不建议使用；(e) 100mM Tris不推荐；(f) β-巯基乙醇与DTT类似，可以加入。
• 问： 在剪切之前需要进行缓冲液交换吗？
• 答： 可能是必要的。

尊龙凯时，成立于2003年，总部位于美国圣地亚哥，致力于为生物研究提供支持，涵盖免疫学、细胞生物学、分子生物学等领域的产品，如代谢检测试剂盒、ELISA试剂盒、生化试剂以及各类酶。我们的目标是为学术界及业界提供优质服务。