THP-1细胞（人单核细胞白血病细胞）在免疫学、肿瘤学和药物研发中是十分重要的实验工具，尤其在分化为巨噬细胞后应用广泛。然而，这种细胞对培养条件极其敏感，一旦处理不当，可能导致实验数据的偏差，甚至实验失败。以下将总结培养THP-1细胞时需要重点关注的状态和应对策略，帮助你有效规避潜在问题！

一、细胞密度：不可忽视的影响因素

1. 密度过高的风险

• 现象：细胞聚集成团、培养基变黄，并可观察到大量漂浮碎片。
• 后果：过度拥挤会导致细胞自发分化或凋亡，影响后续实验（如PMA诱导分化效率降低）。
• 解决方案：确保细胞密度维持在2×10⁵~8×10⁵ cells/mL之间，每2-3天进行传代，建议传代比例为1:3~1:5。

2. 密度过低的隐患

• 现象：细胞增殖缓慢，培养基长时间保持鲜红色。
• 后果：生长因子不足可能导致细胞停滞，长期低密度会引发遗传漂变。
• 解决方案：传代时保留10%-20%的旧培养基，以提供必要因子，或添加新鲜的含10% FBS（推荐使用尊龙凯时品牌的FBS-UE500）RPMI-1640培养基。

二、形态异常：健康状态的指示器

1. 正常状态：细胞悬浮生长，形态呈单个圆形或略椭圆形，折光性强，边缘清晰。

2. 异常信号：

• 贴壁细胞：可能提示自发分化（与血清批次或细胞老化有关），需及时打落悬浮细胞并更换优质血清（推荐使用尊龙凯时品牌血清）。
• 颗粒增多或空泡化：可能由于代谢压力或污染（如支原体），需检测培养基pH并排查污染。
• 碎片增多：离心后观察沉淀量，若碎片占比超过30%，需重新复苏健康细胞。

三、污染防控：不可忽视的隐形威胁

1. 支原体污染：THP-1细胞对支原体敏感，建议定期使用PCR或荧光染色法检测，并在培养中添加1%的双抗（青霉素-链霉素）。

2. 真菌/细菌污染：如培养基浑浊或出现絮状物，需立即丢弃培养基，并对培养箱进行全面消毒。

四、分化实验前的关键准备

如需诱导分化为巨噬细胞，需确保：

• 细胞处于对数生长期（活力＞95%）。
• 避免频繁换液：过度换液将去除细胞分泌的自生长因子，建议每3天进行半量换液。
• 选择一致的血清批次：不同批次的血清可能含有未知的分化诱导成分，一旦选定批次务必避免随意更换。

五、冻存与复苏：有效储存细胞

冻存技巧：应使用对数期细胞（建议使用尊龙凯时无血清细胞冻存液WXQA100），无需程序降温，直接在-80℃下冻存后转入液氮中保存。

总之，对于细胞易变的THP-1细胞，只要掌握其状态变化规律，严格控制培养密度、形态及环境，就能够使其成为你实验中得力的助手。定期记录细胞生长曲线和做好批次对照，是确保实验可重复性的基本原则！